IPTG应用介绍以及生化样品中含量的检测

近年来，分子诊断成为IVD领域较为热门的分支，其检测对象主要为核酸和蛋白质，以核酸分子为主。在其所需要制备的生化样品中，往往会有IPTG的身影。而IPTG价格昂贵，使用量过多时不仅有毒性，还会提高生产成本，所以制品中IPTG含量的检测十分重要。本文将为大家总结IPTG的应用，并介绍一种新的检测IPTG的方法。
IPTG，中文名为异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。其具有如下作用：
（1）挑选基因重组体：当pUC系列的载体DNA以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑选出基因重组体；
（2）作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。IPTG作为一种分子生物学试剂，常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等；基因工程技术中，采用IPTG作为诱导剂，可促进目的蛋白的大量表达。
 其含量该如何检测呢？IPTG实际上是一种半硫代的化合物，由于含硫的化合物分子中缺乏发光基团，无法采用常规的紫外-可见检测器检测，目前最常用的检测方法是衍生化联合荧光的HPLC检测法检测。但是这种检测法费时费力，选择性差。因此，开发一种IPTG含量的检测方法，以实现对生化样品中IPTG含量的准确测定，具有积极的现实意义。研究人员开发了一种IPTG含量的检测方法，包括如下步骤：
（1）前处理：超滤离心（超滤离心管中超滤管的孔径范围为0.001~0.02微米），得到分子量小于3000道尔顿的待测样品；
（2）IPTG标准曲线绘制：配制标准溶液，采用离子色谱-脉冲安培检测法进行检测。色谱柱为反相色谱柱；流动相为缓冲溶液（pH值为1~11）和有机溶剂的混合流动相（体积比为99~80：1~20），得到IPTG标准曲线；
（3）检测待测样品：离子色谱-脉冲安培检测法，并对照标准曲线，得IPTG具体含量。
 该方法采用超滤离心管进行处理样品，快速高效去除体系中的杂质，将处理后的待测样品溶液通过pH缓冲溶液与有机溶剂的混合流动相进入反相色谱柱进行分离，IPTG很快洗脱出来，再通过脉冲安培检测器进行检测，完成分析。样品前处理简便、专属性好、灵敏度高，适于推广应用。
 
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