解析RIPA裂解液的原理

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA裂解液的原理如下（http://www.hnhbsj.com）。

RIPA主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜（包括核膜）。如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。 
 
根据使用量，取每1mlRIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用（PMSF现用现加）。 
1、样品前处理（http://www.hnhbsj.com）： 
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。 
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。 
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 
2、后处理： 
将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 
注意事项 ： 
强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量 SDS（1%），煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
 
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